猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体ELISA检测试剂盒

发布时间：2014-01-06 15:19:20

包装规格：480样/KIT；192样/KIT

一、产品介绍：

    猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体ELISA检测试剂盒用重组PRRSV的N蛋白包被，用来检测血清中N蛋白抗体。在猪群监测中，可为预防和控制该疾病提供有效的信息。

二、实验原理：

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体ELISA检测试剂盒是通过间接ELISA检测血清中PRRSV抗体，用重组N蛋白包被，酶标抗体为猪抗IgG。操作步骤为样品稀释，加样，孵育，洗涤；再加入酶标抗体，如果血清中含有N蛋白抗体，则抗体会与酶标板上包被的重组N蛋白结合，酶标抗体也会与血清中N蛋白抗体结合，加入底物后，颜色将会变深。如果血清中没有N蛋白抗体，颜色变化会很小，或不发生变化。

三、试剂盒内容：

四、采样标准：

1、尽可能采集新鲜血清样品；

2、采集全血，分离出血清后，将血清存放在-20 ℃冰箱，以备使用；

3、不要使用溶血或污染严重的样品；

4、大中型猪场监测中，每群（后备母猪、经产母猪、断奶仔猪等）采样不少于35头份。

五、注意事项：

1、使用之前请仔细阅读操作说明；

2、试剂盒存储条件：4-8 ℃。

六、实验前准备：

1、稀释10倍洗液：如20 mL洗液，加入180 mL去离子水混匀，备用；

2、TMB底物显色液：使用前请恢复到室温，低温可能导致不显色。

七、样品稀释：

1、准备好1 mL样品稀释板或微量试管；

2、100倍稀释样品：分步稀释，先加入90 μL样品稀释液，再加入10 μL的样品血清，混合均匀；再取90 μL样品稀释液，加入10 μL经过第一步稀释的血清，混合均匀即可。（阳性对照血清和阴性对照血清不要稀释）

八、操作步骤：

1、实验前准备及加样

a使用前所有试剂盒组份都必须恢复到室温，试剂应轻轻旋转或振荡均匀；

b取出包被板，标记好样品和阴、阳性对照的位置；（阴阳性对照各做两孔）

c每孔分别加入100 μL阳性、阴性对照和稀释后的样品，贴上封板膜，22-27 ℃孵育30 min。

2、洗板及加试剂

a小心揭去封板膜，弃去各孔中液体，拍净。每孔加满洗液300 μL，洗3次。最后在吸水纸上拍净；

b每孔加入酶标抗体100 μL，置22-27 ℃孵育30 min；

c重复a，洗5-6次；

d每孔加入TMB底物显色液100 μL，22-27 ℃避光孵育15 min。

3、读数

每孔加入终止液50 μL，置酶标仪450 nm波长处测定各OD450值。

九、结果判定

1、实验结果同时符合下列条件，方为有效：

阳性值≥0.5               阴性值≤0.3

2、判定标准：

S/P值的计算方程式：

S/P=【样品值-阴性值】/【阳性值-阴性值】

S/P值≥0.4   判为阳性；

S/P值＜0.3   判为阴性；

0.3≤S/P值＜0.4   可疑。

注：1 检测结果不能区分感染阳性还是免疫阳性；

2 如果检测结果为可疑，请一个月后进行再次检测；

3 如果有阳性结果异常的血清样品，计算该样品S/P平均值，有助于提供更多血清学分析信息。